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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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上海信帆生物提供 Western Blotting檢測服務,全程提供技術指導,代測時間為兩周,歡迎!Western Blotting檢測,WB實驗代測,WB實驗服務
聯(lián)系電話:13764793648
所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
Western Blotting檢測,WB實驗代測,WB實驗服務
免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blotting),它是根據(jù)抗原抗體的特異性結合檢
測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫
生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分
析的一種常規(guī)技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA 結合蛋
白和其相關的DNA 結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術zui初用于研究DNA 結合蛋白,目前已用于研究RNA 結合蛋白和特定的RNA 序列的相互作用。
Western Blotting 技術服務
項目 | 市場價(元) | 優(yōu)惠價(元) | 說明 |
Western blot 檢測 | 1500元/膜 | 電訊元/膜 | 每張膜1--8樣本(一抗需確認) |
EMSA 800 | 2800元/膜 | 電訊元/膜 | 每張膜1--8樣本(探針及試劑需確認) |
Western Blotting 技術服務
Western Blotting檢測,WB實驗代測,WB實驗服務
Western blot樣本要求
客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品, 檢測目的蛋白的一抗(或由本公司代購)。樣品要求為:
1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。
2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。
3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
Western blot結果及數(shù)據(jù)提供
內參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,可提供掃描圖,實驗報告,包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務,將提供檢測報告
Western blot實驗服務
服務內容
我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務,如需要還可進行灰度分析。
說明
1、建議提供目的蛋白陽性表達樣品(純蛋白或有陽性表達的細胞或組織)作為陽性對照。
2、每張膜檢測1-8個樣品。
3、如果一抗由客戶提供,請在正確條件下保存,避免污染及反復凍融。
關于Western blot實驗異常分析
『無信號』
原因 | 建議 |
一抗與二抗不匹配 | 選擇針對一抗來源種屬制備的二抗; |
一抗不識別目的的種屬的蛋白 | 1)檢查抗體的說明書,適用范圍內是否包含目的種屬 |
一抗或二抗不足,沒有足夠的抗體結合到目的蛋白 | 1)降低抗體稀釋倍數(shù),增加抗體濃度 |
封閉劑與一抗有交叉反應 | 改變封閉劑 |
抗原不足 | 1)每個泳道加入20-30ug總蛋白 |
在檢測的組織內目的蛋白表達水平低 | 檢測樣本不表達目的蛋白選擇表達量高的細胞作為陽性對照,用于確定檢測樣本是否為陰性,也可更換細胞系 |
蛋白轉膜效率低 | 1)利用麗春紅檢測轉膜效率;檢查轉移裝置是否電極弄反 |
膜過渡洗滌 | 減少洗滌時間和強度 |
疊氮鈉抑制二抗活性 | 二抗稀釋液內不用疊氮鈉 |
『沒有特異條帶』
原因 | 建議 |
細胞系傳代過多后蛋白表達譜發(fā)送變化 | 1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細胞系進行樣品制備 |
蛋白本身有很多修飾 | 1)查閱文獻,確定目的蛋白是否存在多種修飾 |
蛋白被消化或者降解 | 1)蛋白樣品確保未被污染,確保含有蛋白酶抑制劑 |
所檢測蛋白存在多種剪接體,導致分子量大小不同 | 1)查閱文獻或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
一抗或二抗?jié)舛雀?/span> | 1)減低抗體濃度 |
洗滌不夠 | 1)充分洗滌 |
『條帶大小不正確』
原因 | 建議 |
目的蛋白被降解 | 確保蛋白樣品未被污染,確保含有蛋白酶抑制劑 |
存在不同的剪接體 | 查閱文獻或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
重組蛋白 | 檢測是否存在額外加入的蛋白 |
特殊蛋白如MDM2等 | 仔細閱讀抗體說明書 |
尊敬的客戶:
本公司有放射免疫技術服務、蛋白質組學服務、免疫組化、PCR技術服務、生物信息學數(shù)據(jù)分析等,如果您想了解Western blot的更多內容或者其他服務信息,您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細信息,至善至美的服務是我們永無止境的追求,歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品,我們將竭誠為您服務!
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