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產(chǎn)品展示/ Product display

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李斯特氏菌檢測試劑盒

本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血
清和尿樣中李斯特氏菌殘留的定量檢測。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-10-07
  • 訪  問  量:1653
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詳細介紹

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

 1

李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

1 使用目的:

本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血

清和尿樣中李斯特氏菌殘留的定量檢測。

2 實驗原理

本試劑盒采用競爭ELISA 方法,在微孔板包被有李斯特氏菌偶聯(lián)抗原,加入李斯特氏

菌標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離李斯特氏菌與微孔條上預(yù)包被的李斯特氏菌偶聯(lián)抗原互相競爭抗李斯

特氏菌抗體酶標(biāo)記物,用TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在

450nm 波長下進行檢測,吸光值與樣品中李斯特氏菌含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中

李斯特氏菌的含量。

李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒3 試劑盒組成

3.1 預(yù)包被的李斯特氏菌偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1 塊(12 孔×8 條)。

3.2 李斯特氏菌標(biāo)準(zhǔn)品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1

ppb。

3.3 抗李斯特氏菌抗體酶結(jié)合物:1 瓶(6ml)。

3.4 顯色液A:1 瓶(6ml)。

3.5 顯色液B:1 瓶(6ml)。

3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

3.7 樣本稀釋液:1 瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。

3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

3.9 說明書一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 設(shè)備

4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。

4.1.2粉碎機。

4.1.3量筒。

4.1.4振蕩器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒5 貯存

5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

6 注意事項

6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。

2

6.2 不要使用過期試劑盒。

6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。

6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有李斯特氏菌,使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。

6.5 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果。

6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響

實驗結(jié)果。

6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果

6.9 混合試劑時應(yīng)避免起泡。

李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒7 工作液準(zhǔn)備

7.1 李斯特氏菌標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

7.3 顯色劑:已備用,避免光線直照

7.4 反應(yīng)終止液:已備用

8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則

會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強力振蕩3分鐘

8.3用Whatman 濾紙過濾

8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)

9 酶免分析步驟

9.1 實驗須知

9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦?/p>

溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。

9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

9.1.3 請不要改變分析程序

9.1.4 請使用精確的微量移液器

9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序

9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作

9.1.7 為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

9.2 分析步驟

9.2.1 預(yù)*行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測

9.2.2 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗李斯特氏菌抗體酶結(jié)合物

9.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液

3

體。

李斯特氏菌酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒9.4 反應(yīng)

9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯

色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻

9.4.2 37℃溫浴10min

9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻

9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

10 結(jié)果計算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))

的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

10.1.2以李斯特氏菌濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品

百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),即為李斯特氏菌濃度的對數(shù)值,求得反對

數(shù)即為測定液中李斯特氏菌濃度C(ppb)

10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋

倍數(shù)。

10.2 半定量測定

10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光

度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色

深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

11 特異性

物質(zhì) 交叉反應(yīng)

李斯特氏菌 100%

12 試劑盒參數(shù)

本試劑盒檢測下限為0.05ppb

B0吸光度*值應(yīng)大于1.0

試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

13

試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。

14 分析限制

本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。

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