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PCR代測服務(wù)之PCR操作環(huán)節(jié)注意事項

更新時間:2015-08-31      瀏覽次數(shù):1238

上海信帆生物提供PCR代測服務(wù),代測時間7-10個工作日。老師您只需要提供樣本即可,其他所有試劑均由我們提供,包括引物,Trizol Trizd PCR試劑盒等。的實驗室,熟練的操作人員檢測,確保每一份樣本數(shù)據(jù)的真實性,咨詢。

PCR檢測微量感染因子時,容易因為污染的而導(dǎo)致各種問題,因此,進行PCR操作時,操作人員應(yīng)該嚴格遵守一些操作規(guī)程,zui大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
(1)劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現(xiàn)*閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區(qū)域內(nèi)進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進行:
① 標本處理區(qū),包括擴增摸板的制備;
② PCR擴增區(qū),包括反應(yīng)液的配制和PCR擴增;
③ 產(chǎn)物分析區(qū),凝膠電泳分析,產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。
各工作區(qū)要有一定的隔離,操作器材,要有一定的方向性。如:標本制備→PCR擴增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。
切記:產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個工作區(qū)。
(2)分裝試劑:PCR擴增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺或負壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴增后的DNA和其他來源的DNA:
① PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產(chǎn)物區(qū)配制;
③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲存,分裝時應(yīng)標明時間,以備發(fā)生污染時查找原因。
(3) 實驗操作注意事項 盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應(yīng)是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
① 戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
② 使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
③ 避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
④ 操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的度;
⑤ zui后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
⑥ 操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器zui容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
⑧ 重復(fù)實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。

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