對于實驗質(zhì)量管理來說的*要素是，選擇和執(zhí)行適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制（internal quality control,IQC）程序，例如根據(jù)測定項目的質(zhì)量要求和方法特點選擇統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)、控制規(guī)則和質(zhì)控品的數(shù)目，并嚴(yán)格執(zhí)行IQC程序以提高IQC的質(zhì)量。室內(nèi)質(zhì)控方法很多，但酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）中仍主要采用Levey-Jennings質(zhì)控圖。筆者長期從事免疫學(xué)檢驗質(zhì)量管理工作。發(fā)現(xiàn)醫(yī)院、血站檢驗科在實際工作中存在一些比較普遍的問題或疑問。根據(jù)自身實踐經(jīng)驗，結(jié)合相關(guān)專著，簡要介紹如下，供實驗室參考。

1.質(zhì)控品準(zhǔn)準(zhǔn)備

1.1 質(zhì)控品濃度 以需要質(zhì)控的點設(shè)值進(jìn)行質(zhì)控，般在Cut-of值（即CO值，是由試劑盒提供的公式計算出的陰、陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)）附近選點。建議選點方法。選擇S/CO值減去精密度測定中得到的3倍批間CV與S/CO值的乘積（意即3倍s）仍大于1的質(zhì)控血清作為判斷實驗室重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控點。

1.2 購買質(zhì)控品建議用戶購買質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，這樣的質(zhì)控品的穩(wěn)定性更有保證。上海信帆生物長期生物試劑和供應(yīng)各類質(zhì)控品，：www.fc323.com,:

1.3 自制質(zhì)控品的制備方法 （1）收集陽性血清（無明顯溶血、黃疽、脂血或污染血清），累積到一定數(shù)量（夠本室使用6月以上）；（2）混勻，經(jīng)56℃ lO小時滅活，（3）離心或過濾，去除纖維沉淀物（4）用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋．使S/CO值達(dá)到2～4之間（5）與定值參考品進(jìn)行對比，求測定值（6）將質(zhì)控血清按0.2～O.5毫升/支分裝、封口、貼簽，置-2O℃保存。

2.如何正確應(yīng)用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控不能隨意使用“即刻法”，以下情況下可使用：（1）實驗室不是每天進(jìn)行ELISA項目的檢驗，而ELISA試劑盒效期短．用一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)檢測2O次以獲得RCV數(shù)據(jù)難度較大。采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計方法，只需連續(xù)測3次，即可對第3次檢驗結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控；（2）在某一檢測項目開始準(zhǔn)備開展Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控，尚未完成RCV測定時使用，其目的是盡早啟動室內(nèi)質(zhì)控，在開展lI缶床實驗的同時進(jìn)行RCV測定，以便在獲取足夠數(shù)據(jù)后轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。由于數(shù)據(jù)量小，質(zhì)控規(guī)則單一，“即刻法”質(zhì)控方法可靠性相對較差。在使用該質(zhì)控方法時，務(wù)必加強(qiáng)實驗全程監(jiān)控以保證質(zhì)量，并在獲取足夠數(shù)據(jù)后及時轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。實驗室需要更換質(zhì)控品批號時，應(yīng)提前開始下一批號質(zhì)控品RCV靶值和標(biāo)準(zhǔn)差的測定，盡量避免使用“即刻法”質(zhì)控方法。

3.質(zhì)控規(guī)則的選擇

一般以x靶±2s為警告限，以x靶士3s為失控限（這是*的判斷實驗結(jié)果是否失控的原則），獲得“常規(guī)實驗室質(zhì)量控制圖”空圖。每次（或每天）隨患者樣本測定的質(zhì)控物值，標(biāo)記在質(zhì)控圖上。分析質(zhì)控圖中每天檢測質(zhì)控標(biāo)本的結(jié)果分布，判斷當(dāng)天檢測的結(jié)果數(shù)值是否在控制限之內(nèi)。各實驗室選擇失控*，應(yīng)根據(jù)本室條件進(jìn)行選定。失控限定得太寬，幾乎不必?fù)?dān)心有失控可能，這樣常將失控結(jié)果誤判為合格，使質(zhì)控失去意義；相反，失控限定得太嚴(yán)，使太多的結(jié)果甚至合格的結(jié)果判為失控，這也使質(zhì)控失去意義。依據(jù)本室條件，設(shè)定失控限，是室內(nèi)質(zhì)控重要的環(huán)節(jié)。Westgard多規(guī)則質(zhì)控分析法：在質(zhì)控圖中，單純依據(jù)質(zhì)控點超出2s為警告，超出3s為失控，在研究檢驗中已顯不夠。Westgard將常用的判斷失控的規(guī)則總結(jié)出許多條規(guī)則，選擇質(zhì)控規(guī)則時必須兼顧室內(nèi)質(zhì)控對失控的檢出能力及誤判失控的可能性。在免疫學(xué)檢驗質(zhì)控中，建議實驗室選擇使用以下

幾種質(zhì)控規(guī)則：（1）13s:1個質(zhì)控點落在士3s之外；（2）R4s：連續(xù)2個質(zhì)控點相差超出4s范圍；（3）41s:連續(xù)4個質(zhì)控點落在同一側(cè)士1s之外；（4）7x靶：連續(xù)7個質(zhì)控點落在均值之一側(cè)；（5）7t：連續(xù)7個質(zhì)控點呈連續(xù)上升或下降，或周期性波動變化。質(zhì)控規(guī)則還有很多，各實驗室可依據(jù)自己的實際情況選擇質(zhì)控規(guī)則。

4．更換試劑批號的處理方式

由于Elisa試劑盒的效期相對較短，而在冷凍條件下，免疫質(zhì)控血清效期相對較長，一個批號的質(zhì)控血清往往要幾個批號的試劑才會用完，因此實驗中常會遇到更換試劑批號后如何處理質(zhì)控圖的問題。更換不同廠家的試劑必須重新計算RCV（在更換前完成RCV的測定，以免中斷室內(nèi)質(zhì)控）。更換相同廠家不同批號的試劑，使用質(zhì)控血清濃度值上下相鄰的系列質(zhì)控血清驗證新批號試劑S/CO值的一致性。推薦對不同批號試劑間系列血清結(jié)果回歸方程進(jìn)行比較，以獲得兩批試劑間的換算因子，可以在同一質(zhì)控圖上繼續(xù)描點。當(dāng)換算因子為1時，使用實測S/CO值作圖。從理論上說，兩個回歸方程經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義時，可以延續(xù)使用上批號質(zhì)控圖。

5.分批質(zhì)控方法

進(jìn)行大批量標(biāo)本的檢測時存在批內(nèi)變異與批間變異的問題。有的實驗室每天需測試數(shù)百人的血清樣品，使用數(shù)塊甚至數(shù)十塊微孔板這就存在同一天檢測數(shù)塊板之間的變異（批內(nèi)變異）和不同天檢測之間的變異（批間變異）的問題。推薦進(jìn)行免疫實驗室室內(nèi)質(zhì)控的批內(nèi)、批間室內(nèi)質(zhì)量控制具體方法如下（以1 ncu/ml抗-HIV舉例）。

5.1 每天進(jìn)行多個酶標(biāo)板檢測，每板均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本測定，計算室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本的S/CO值，見表1。計算上表各板質(zhì)控數(shù)據(jù)均數(shù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差時需遵循RCV的計算原則。2o d均值的均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，即為批間變異的靶值和標(biāo)準(zhǔn)差（），以控制天間變異，也稱批間變異,以2O天的標(biāo)準(zhǔn)差的均值作為批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差，以20天均值的均值作為批內(nèi)靶值（），以控制天內(nèi)不同檢測批之間的變異，也稱批內(nèi)變異。

5.2 批內(nèi)和批問Levey-Jennings質(zhì)控圖的繪圖方法批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖用每個酶標(biāo)板質(zhì)控S/CO值描點，以觀察和控制各板之問的變異。批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖描點描在一張質(zhì)控圖上（注意區(qū)分，作好相應(yīng)記錄），便于觀察質(zhì)控結(jié)果的集中趨勢和離散程度，也可以按完成檢測批的先后順序描在數(shù)張質(zhì)控圖上，每天按相應(yīng)批對應(yīng)作圖。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖用發(fā)出報告時已經(jīng)完成的各個酶標(biāo)板質(zhì)控S/CO值的均值描點，以控制日間變異。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖繪圖方法可能有不確定的時候，如完成*批或第二批時，可能不知道是否還有第三批甚至第四批（對于醫(yī)院系統(tǒng)尤其可能發(fā)生，因為當(dāng)天標(biāo)本數(shù)量不能確定，而先完成的報告不可能等所有標(biāo)本完成檢測后才發(fā)出），筆者建議可以以當(dāng)前已有質(zhì)控S/CO值的均值描點，作為當(dāng)前批間Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判斷已完成檢測結(jié)果的質(zhì)控狀態(tài)；當(dāng)有新的質(zhì)控數(shù)據(jù)產(chǎn)生后，與前述質(zhì)控數(shù)據(jù)（如有失控，則應(yīng)剔除失控的質(zhì)控S/CO值）,計算S/CO值均值并描點，作為新的批閱Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判斷新完成檢測結(jié)果的質(zhì)控狀態(tài)。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖描點與批問Levey-Jennings質(zhì)控圖描點一樣，既可以集中在一張質(zhì)控圖上作圖，也可以按完成檢測批的先后順序分開作圖。

以上過程仍可以使用 即刻法”質(zhì)控方法，批內(nèi)“即刻法”質(zhì)控以每天各檢測批（第3批起）的質(zhì)控S/CO值進(jìn)行,批間“即刻法”質(zhì)控以每天（第3天起）的質(zhì)控S/CO值均值進(jìn)行要特別注意的是，如果在批內(nèi)和批間Levey-Jennings質(zhì)控圖中使用Westgard多規(guī)則，由于每天可能有數(shù)個質(zhì)控點，在選擇規(guī)則時，不是越多越好，而應(yīng)重點觀察質(zhì)控結(jié)果的集中趨勢和離散程度。

6.復(fù)檢的重要性

實驗室應(yīng)對有疑問的結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢。下面以乙型肝炎標(biāo)志物為例介紹復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)及復(fù)檢結(jié)果的判斷方法。

6.1 復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn) 復(fù)檢主要是針對有疑問或少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行重新實驗。（1）對弱陽性結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢：建議對如下弱陽性結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢：HBsAg 1≤S/CO<10l抗HBs 1≤S/CO<2；HBeAg 1≤S/CO<2；抗-HBe 0.3≤ S/CO<1l抗一HBe 0.3≤S/CO<1。（2）對少見模式結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢：建議對少見模式結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢見表2。

6.2 對復(fù)檢結(jié)果的判斷及報告對復(fù)查結(jié)果的判斷應(yīng)結(jié)合比色結(jié)果和組合模式進(jìn)行。初、復(fù)檢結(jié)果一致，報告初檢結(jié)果；初、復(fù)檢結(jié)果不一致，但均接近CO值，可結(jié)合其他指標(biāo)報告結(jié)果，或再次復(fù)檢，以兩次一致結(jié)果報告；對體檢標(biāo)本，單獨的抗-HBe（或兼抗-HBs）或抗-HBc（或兼抗-HBs）陽性，且接近S/CO值，復(fù)檢結(jié)果為陰性，可報告陰性。已經(jīng)復(fù)檢的結(jié)果應(yīng)在報告中加以注明，如“結(jié)果已經(jīng)復(fù)查”或“兩次結(jié)果一致”等。對特殊模式結(jié)果提出建議，如“建議重新抽血復(fù)查”或“建議跟蹤復(fù)查”等。

7.質(zhì)控分析的基本原則

7.1 實事求是的原則 室內(nèi)質(zhì)量控制分析的處理方法必須實事求是，充分認(rèn)識實驗過程中可能影響到檢驗結(jié)果可靠性的各種問題，逐一進(jìn)行分析、糾正。

7.2 不與實驗原理和試劑盒使用說明相抵觸的原則對質(zhì)量控制結(jié)果的分析和處理必須符合試劑盒的設(shè)計原理，并不得與試劑盒使用說明書相抵觸，沒有根據(jù)的分析和處理過程是不被認(rèn)可的。

7.3 不與研究檢驗操作規(guī)程和質(zhì)量管理體系相抵觸的原則整個分析處理過程務(wù)必科學(xué)、全面，不與研究檢驗操作規(guī)程和質(zhì)量管理體系相抵觸，要足以為相關(guān)舉證工作提供依據(jù)。

7.4 復(fù)檢確認(rèn)的原則幾種可能的失控，如假失控，無需立即重新檢測患者標(biāo)本的失控，或者需要立即重新檢測患者標(biāo)本的失控，原則上都必須對質(zhì)控品進(jìn)行復(fù)檢以驗證失控原因分析和處理是否正確，以及失控原因是否得以糾正。只有極少數(shù)情況，如設(shè)置CO公式錯誤，或選擇比色波長不正確，又未超過比色時間，可糾正錯誤后重新比色，不必復(fù)檢確認(rèn)Leve-Jennings質(zhì)控是zui重要的量化室內(nèi)質(zhì)控，嚴(yán)謹(jǐn)而客觀地實施，動態(tài)地分析質(zhì)控結(jié)果十分重要。同時，Levey-Jennings質(zhì)控有其自身的局限性，它不是判斷實驗結(jié)果是否可靠的*標(biāo)準(zhǔn)，實驗室每一個環(huán)節(jié)都與檢驗質(zhì)量密切相關(guān)，實驗室工作人員只有認(rèn)真對待，耐心細(xì)致地做好各方面的工作，才是檢驗質(zhì)量可靠性的根本保證。