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人端粒酶(TE)檢測原理!

更新時(shí)間:2021-10-18      瀏覽次數(shù):2063

人端粒酶(TE)檢測原理!

端粒酶(Telomerase),在細(xì)胞中負(fù)責(zé)端粒的延長的一種酶,是基本的核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶,可將端粒DNA加至真核細(xì)胞染色體末端,把DNA復(fù)制損失的端粒填補(bǔ)起來,使端粒修復(fù)延長,可以讓端粒不會(huì)因細(xì)胞分裂而有所損耗,使得細(xì)胞分裂的次數(shù)增加。

產(chǎn)品名稱:人端粒酶(TE)ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格:96T

儲(chǔ)存條件:2-8℃,避光防潮保存

有效期:6個(gè)月

檢測原理:

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人端粒酶(TE)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人端粒酶(TE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

實(shí)驗(yàn)步驟(僅供參考)

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒性能:

1.準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 ng/ml。

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。


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