ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用,然而實(shí)驗(yàn)新手們面對(duì)各種各樣、動(dòng)則上上千種的
ELISA試劑盒,內(nèi)心應(yīng)該是崩潰的。下面跟小編一起看看怎么操作它。
Elisa試劑盒的操作步驟:
一、樣品準(zhǔn)備
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按稀釋(如血清加入樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
二、檢驗(yàn)方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液;陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液,混勻,用空白孔調(diào)零,于(可用作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。