玉米赤霉烯酮酶免檢測(cè)試劑盒適合檢測(cè)什么樣本？

上海信帆生物供應(yīng)玉米赤霉烯酮酶免檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，現(xiàn)貨充足。

玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) 

【概要】

玉米赤霉烯酮（Zearaleaone，ZEN）又稱F-2 毒素，是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物，有雌激素樣作用，具有較強(qiáng)的生殖毒性致畸作用，可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥，導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn)，對(duì)家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來(lái)很大經(jīng)濟(jì)損失。

【適用范圍】

本試劑盒可定性、定量檢測(cè)谷物及其加工制品和飼料中的

玉米赤霉烯酮。

【試驗(yàn)原理】

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA 方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被玉米赤霉烯酮抗原，樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗玉米赤霉烯酮抗體（抗試劑），同時(shí)抗玉米赤霉烯酮抗體與酶標(biāo)二抗（酶標(biāo)物）相結(jié)合，經(jīng)TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含玉米赤霉烯酮的含量成負(fù)相關(guān)，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。

【試劑盒組成】

1. 96 孔板（8 孔*12 條）

2. ZEN 標(biāo)準(zhǔn)溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）

0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL

3. ZEN 酶標(biāo)物1 瓶.............. ....................................6mL

4. ZEN 抗試劑1 瓶....................................................6mL

5. 底物液1 瓶.............................................................6mL

6. 顯色液1 瓶.............................................................6mL

7. 終止液1 瓶.............................................................6mL

8. 濃縮洗滌液（20×） 1 瓶...............................20mL

9. 樣品稀釋液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL

10. 樣品稀釋液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL

11. 反應(yīng)板支架.............................................................1 塊

注：48 孔型號(hào)試劑盒內(nèi)容物數(shù)量、體積略有差別

【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備：

┅┅酶標(biāo)儀450nm

┅┅振蕩器

┅┅粉碎機(jī)

┅┅離心機(jī)

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?0μL~200μL、100μL~1000μL

┅┅甲醇

┅┅去離子水

注：以上儀器均可代購(gòu)

【試劑配制】

1. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進(jìn)行稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。

2. 60%甲醇-水：取無(wú)水甲醇，用去離子水按6:4 體積比例稀釋（6 份無(wú)水甲醇＋4 份水）。

【樣本前處理步驟】

一、小麥、大麥等谷物及其加工制品（稀釋倍數(shù)：20）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過(guò)濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用去離子水以1:3 稀釋（例：1mL 濾液+3mL 去離子水），充分混勻后即為待測(cè)樣液；

4. 移取該樣液50uL 進(jìn)行檢測(cè)。

二、玉米粉、麥類、麩皮、豆粕等谷物類以及玉米蛋白粉、雞料等飼料（稀釋倍數(shù)：60）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過(guò)濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測(cè)樣液；

4. 稀釋后的待測(cè)樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL進(jìn)行檢測(cè)。

三、DDGS、玉米皮等飼料原料及豬料、鴨料、牛料等飼料混

合料（稀釋倍數(shù)：60）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過(guò)濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅱ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅱ），充分混勻后即為待測(cè)樣液；

4. 稀釋后的待測(cè)樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL 進(jìn)行檢測(cè)。

注意：若樣品中ZEN 偏高，建議將樣品提取液再進(jìn)一步稀釋后檢測(cè)。

【檢測(cè)步驟】

一、測(cè)定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫（20~25℃）。

2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。

3. ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致

性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點(diǎn)。

4. 在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋

住微孔板。

二、操作步驟：

1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min

以上，液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出所需數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，

放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。

3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔編號(hào)，建議每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。

6. 分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液/待測(cè)樣液50μL 到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入酶標(biāo)物50μL/孔，后再加入抗試劑50μL/孔，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光反應(yīng)20min。

7. 小心揭開(kāi)蓋板，甩掉反應(yīng)液，加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍干。

8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光顯色15min。

9. 加入終止液50μL/孔，輕輕震蕩混勻，設(shè)酶標(biāo)儀于450nm處讀取每孔OD 值。

(若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

★注：該試劑盒佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)

致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。若環(huán)境溫度高于或低于

25℃，請(qǐng)適當(dāng)縮短或增加反應(yīng)及顯色時(shí)間。如有疑問(wèn)，歡迎

垂詢。

【結(jié)果判定】

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

用酶標(biāo)儀測(cè)得每孔的光密度值(A)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)

準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確定量樣品中ZEN 含量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：橫坐標(biāo)為ZEN 標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)為百

分比（即各標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品

孔光密度值(A0)再乘以100%所得， 光密度值(標(biāo)準(zhǔn)孔或樣品

孔) ／光密度值(A0)×100%=%(縱坐標(biāo))）。相應(yīng)每個(gè)樣品的

ZEN 濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門(mén)的數(shù)據(jù)處理軟

件進(jìn)行計(jì)算。

備注：試劑盒初篩后，若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，建議用仲裁法進(jìn)一步

確證。

【注意事項(xiàng)】

1. 試劑及樣本沒(méi)有恢復(fù)到室溫（20~25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)

的OD 值偏低。

2. 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)

曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)

立即進(jìn)行下一步操作。

3. 每種試劑使用前均需搖勻。

4. 反應(yīng)終止液為2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過(guò)了有

效期的試劑盒；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

6. 儲(chǔ)存條件：試劑盒保存于2~8℃，不能冷凍，將不用的

微孔板重新真空密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的顯色劑對(duì)光敏

感，因此要避光保存。

7. 試劑變質(zhì)的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì)，

應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5

（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8. 對(duì)玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v）

溶液浸泡過(guò)夜。

9. 該試劑盒采用室溫反應(yīng)（20~25℃），當(dāng)反應(yīng)溫度高于

25℃或者低于20℃時(shí)，均需相應(yīng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。

保存期：該產(chǎn)品有效期為6 個(gè)月。生物試劑日期見(jiàn)包裝盒。

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