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甘油檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),甘油試劑盒

更新時(shí)間:2019-11-06      瀏覽次數(shù):1570

甘油檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),甘油試劑盒

上海信帆生物供應(yīng)甘油檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),甘油試劑盒,產(chǎn)品備有大量現(xiàn)貨,靈敏度高,適用于組織,細(xì)胞樣本,也有專門針對(duì)血清樣本的。

甘油檢測(cè)試劑盒說明書

描述:甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo),但檢測(cè)更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法,通過比色法測(cè)定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后,操作步驟更加簡(jiǎn)單,檢測(cè)線性范圍在10-1200µmol/L,可靠性和重復(fù)性俱佳,適合生物醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

參考文獻(xiàn):

Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145

原理:在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍:測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 :  

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標(biāo)準(zhǔn)品1 ml

4 ºC,儲(chǔ)存3個(gè)月。

所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計(jì)。佳工作波長(zhǎng)550nm,如無此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。

操作步驟

 樣本處理:

酒類、飲品、清澈液體樣本:可直接進(jìn)行測(cè)定,如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測(cè)定。

培養(yǎng)液:取不含酚紅、無顏色、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基,如有細(xì)胞碎片應(yīng)4ºC,,12,000g離心5min,取上清進(jìn)行測(cè)定。

血液:新鮮抗凝血,4ºC,2,000g離心5min得到血漿;非抗凝血,先4ºC靜置2h得到血清后,2000g離心10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清70ºC 加熱10分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶,12,000g離心10min ,取上清測(cè)定或-20ºC保存。

 工作溶液配制:按4:1比例,取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合,立即使用或4ºC保存<1天,變色棄去。

 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體,將4 mM甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。

 甘油濃度測(cè)定:

參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致,減小實(shí)驗(yàn)誤差,可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當(dāng)甘油濃度較低時(shí),可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進(jìn)行測(cè)定,但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度,使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過線性范圍,可進(jìn)行適當(dāng)稀釋,然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。)

37ºC或25ºC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,然后測(cè)定各管OD值。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附Excel作圖步驟:各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸,標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),點(diǎn)擊做圖向?qū)?,選擇-散點(diǎn)圖-,點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn),點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-,點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。

 

表一:

  酶標(biāo)微板測(cè)定的加樣比例(檢測(cè)范圍10-1200µmol/L)

      (可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整)

 

低濃度甘油樣品測(cè)定

高濃度甘油樣品測(cè)定

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

蒸餾水µl

50

 

 

5

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品µl

 

50

 

 

5

 

樣品µl

 

 

50

 

 

5

工作液µl

150

150

150

195

195

195

 

 

表二:

1 ml比色杯測(cè)定的加樣比例(檢測(cè)范圍10-1200µmol/L)

 

低濃度甘油樣品測(cè)定

高濃度甘油樣品測(cè)定

 

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)品

樣本管

蒸餾水µl

200

 

 

50

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品µl

 

200

 

 

50

 

樣品µl

 

 

200

 

 

50

工作液µl

600

600

600

750

750

750

 

說明:

1、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測(cè)試。

2正常血清甘油濃度為20-130µmol/L,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中含有酚紅,可以選擇含有酚紅的無細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定

甘油檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),甘油試劑盒

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