PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類技術(shù)文章/ Technical Articles
上海信帆生物供應(yīng)低密度脂蛋白膽固醇測(cè)試盒,提供LDL-C實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)試盒說(shuō)明書
(直接法)
一、試劑組成及配制(100 管/96 樣):
試劑組成 | 規(guī) 格 | 組 份 | 濃 度 | 保存條件 |
R1 |
75ml×1 瓶 | Good’s 緩沖液 | 50mmol/L |
2~8℃ 避光保存 |
4-氨基安替比林 | 0.2mmol/L | |||
氯化鎂.6 合水 | 15mmol/L | |||
膽固醇氧化酶 | ≥3KU | |||
膽固醇酯酶 | ≥2KU | |||
過(guò)氧化物酶 | ≥5KU | |||
表面活性劑 1 | 0.1% | |||
R2 |
25ml×1 瓶 | Good’s 緩沖液 | 50mmol/L | |
Toos | 1.0mmol/L | |||
防腐劑 | 100mg/L | |||
表面活性劑 2 | 0.1% | |||
校準(zhǔn)品 | 0.1ml×1 支 | 膽固醇 | 4.3mmol/L |
三、測(cè)定步驟:
1、樣本處理:
①、血清(漿):直接測(cè)定,如超過(guò)線性范圍用生理鹽水稀釋后測(cè)定。
②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清測(cè)定。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/ml 以上。
③、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介 質(zhì),冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液待測(cè)。
[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。 2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質(zhì)可統(tǒng)一用無(wú)水乙醇進(jìn)行提取。
④、細(xì)胞樣本:
A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉 淀;用等滲緩沖液(推薦 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗 1~2 次,同樣 1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;
B、細(xì)胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(zhì)(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理 鹽水)進(jìn)行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復(fù) 3~ 5 次)或手動(dòng)勻漿,制備好的勻漿液不離心待測(cè)。也可采用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,
1~2%,裂解 30~40 分鐘),裂解好的液體不離心直接測(cè)定
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/ml 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎*
1、試劑空白管吸光度≤0.050(光徑 0.5cm)。
2、靈敏度:測(cè)試 2.6mmol/L 被測(cè)物時(shí),吸光度差值△A 為 0.180~0.280
3、線性范圍:2~12mmol/L,r2>0.995
4、精密度:變異系數(shù)≤8%,批間差:相對(duì)偏差≤10%
5、穩(wěn)定性:原包裝試劑盒在 2℃~8℃避光保存,有效期為 12 個(gè)月。開(kāi)啟后 2℃~8℃避光保存, 可穩(wěn)定一個(gè)月。
四、注意事項(xiàng):
1、本產(chǎn)品僅用于科研,不得用于研究診斷,切勿服用。
2、樣品含量如超出檢測(cè)范圍上*,可用生理鹽水稀釋樣本后進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
3、試劑防止葡萄糖、膽固醇等試劑的污染。
4、試劑與樣本量可按照比色杯體積,按比例增減。
2、樣品含量如超出檢測(cè)范圍上*,可用生理鹽水稀釋樣本后進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
3、試劑防止葡萄糖、膽固醇等試劑的污染。
4、試劑與樣本量可按照比色杯體積,按比例增減。
低密度脂蛋白膽固醇測(cè)試盒現(xiàn)貨供應(yīng),提供LDL-C實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)
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